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《流式细胞术——原理、操作及应用（第二版）》主要介绍流式细胞术的原理、操作及应用，分为概述、流式细胞仪的原理、流式图、流式细胞术的基本操作与技巧、流式分析术的应用和流式分选术的应用6个部分。概述部分介绍基本概念和几款常见的流式细胞仪；原理部分具体介绍流式细胞仪的液流系统、光路系统、检测分析系统和分选系统；流式图部分主要介绍了流式通道、流式直方图、流式散点图和流式等高线图；操作部分介绍了样品制备、荧光素偶联抗体及标记、光电倍增管电压设定、对照设置、补偿调节、阈值设定、死细胞问题处理、分选模式选择、上样速度控制、分选设门原则、分选基本步骤等内容；流式分析术的应用部分具体介绍了流式细胞术在免疫学方面的应用，并且扩展到基础医学和生物学方面的应用；流式分选术的应用部分阐述了不同条件下流式分选的策略选择和注意事项，同时还介绍了各种干细胞包括肿瘤干细胞等的流式分选方法。

目录

序 i

第二版前言 v

**版前言 vii

1 概述 1

1.1 流式细胞术基本概念 2

1.2 分析型流式细胞仪介绍 5

1.3 分选型流式细胞仪介绍 9

参考文献 13

2 流式细胞仪的原理 14

2.1 液流系统 15

2.2 光路系统 18

2.3 检测分析系统 28

2.4 分选系统 32

参考文献 37

3 流式图 39

3.1 流式通道 40

3.2 流式直方图 41

3.3 流式散点图 45

3.4 流式等高线图 48

参考文献 50

4 流式细胞术的基本操作与技巧 51

4.1 样品制备 52

4.1.1 *立细胞样品制备 52

4.1.2 免疫器官样品制备 54

4.1.3 实体脏器样品制备 55

4.2 荧光素偶联抗体及其标记方法 56

4.2.1 荧光素 57

4.2.2 荧光素偶联抗体 61

4.2.3 样品封闭 62

4.2.4 荧光素偶联抗体标记 64

4.3 光电倍增管电压设定 66

4.4 对照的设置 71

4.4.1 阴性对照的设置 71

4.4.2 FMO对照 73

4.4.3 阳性对照的设置 74

4.5 补偿调节 75

4.5.1 补偿调节的原理 75

4.5.2 调节补偿的具体方法 76

4.5.3 三色和四色分析补偿调节方法 79

4.5.4 影响补偿大小的因素 82

4.6 阈值设定 84

4.7 流式分析中的死细胞问题 85

4.7.1 减少样品中死细胞比例的方法 86

4.7.2 流式分析时区分死细胞和活细胞的方法 86

4.8 流式分选模式选择 91

4.8.1 纯化模式 92

4.8.2 富集模式 93

4.8.3 单细胞模式 93

4.9 上样速度控制 94

4.9.1 流式分析速度控制 95

4.9.2 流式分选速度控制 95

4.10 分选设门基本原则 97

4.11 流式分选基本步骤 99

参考文献 100

5 流式分析术的应用 102

5.1 细胞群比例测定 103

5.2 表型测定 109

5.3 检测细胞因子 115

5.3.1 胞内染色法检测细胞因子 116

5.3.2 胞内染色法与ELISA法比较 123

5.3.3 CBA法测定细胞因子 125

5.3.4 CBA法与ELISA法比较 127

5.4 检测细胞增殖 128

5.4.1 相对计数法 129

5.4.2 示踪染料标记法 133

5.4.3 BrdU和EdU掺入法 138

5.4.4 其他方法 141

5.5 检测细胞凋亡 142

5.5.1 annexin V/PI双染色法 142

5.5.2 SYTO/PI双染色法 145

5.5.3 细胞DNA含量分析法检测细胞凋亡 146

5.5.4 线粒体损伤检测法 147

5.5.5 活化的caspase-3检测法 151

5.5.6 荧光素偶联的caspase抑制剂(FLICA)标记法 151

5.5.7 甲酰胺诱导ssDNA单抗检测法 152

5.5.8 TUNEL法 153

5.6 检测细胞周期 154

5.6.1 非特异性核酸荧光染料标记法 154

5.6.2 特异性细胞周期调节蛋白检测法 159

5.7 检测细胞杀伤能力 160

5.8 检测细胞吞噬功能 166

5.9 检测胞内活化的激酶 168

5.10 检测细胞自噬 169

5.11 检测基因表达 171

5.11.1 GFP报告基因系统 171

5.11.2 lacZ报告基因系统 172

5.11.3 β-内酰胺酶报告基因系统 173

5.11.4 新型膜结合型报告分子系统 174

5.12 检测细胞内两种蛋白质的直接结合 174

5.12.1 荧光共振能量转移结合流式细胞术检测两种蛋白质的直接结合 174

5.12.2 双分子荧光互补结合流式细胞术检测两种蛋白质的直接结合 176

5.13 微生物学中的应用 177

5.13.1 荧光素偶联抗体直接检测法 178

5.13.2 抗体结合人工荧光微球直接检测法 179

5.13.3 微生物活性流式检测 179

5.13.4 人工微球荧光免疫试验检测抗体 180

5.13.5 荧光原位杂交流式检测法 181

5.13.6 PCR免疫微珠法 182

5.13.7 原位PCR杂交流式检测法 182

5.14 检测钙相关分子 183

5.14.1 检测细胞内游离的钙离子水平 183

5.14.2 检测钙蛋白酶活性 184

5.14.3 检测细胞膜钙泵活性 186

5.15 表观遗传学中的应用 188

5.15.1 ChIP-on-beads法 189

5.15.2 检测细胞水平组蛋白修饰情况 191

5.16 检测缝隙连接介导的细胞通讯 191

5.17 检测细胞内pH值和钠氢转运体活性 194

5.17.1 检测细胞内pH值 194

5.15.2 检测钠氢转运体活性 196

5.18 其他应用 197

5.18.1 检测活性氧簇 197

5.18.2 检测细胞内游离的锌离子水平 198

5.18.3 检测端粒长度 199

5.18.4 检测脂筏结合蛋白 201

引文目录 203

参考文献 207

6 流式分选术的应用 211

6.1 流式分选与磁性分选 212

6.2 流式分选*立群体细胞 214

6.3 流式分选非*立细胞群体 216

6.4 流式分选低比例细胞群体 220

6.4.1 强势细胞群的辐射影响 220

6.4.2 流式分选结合磁性分选 221

6.4.3 二次分选法 222

6.5 流式分选干细胞 224

6.5.1 流式分选造血干细胞 224

6.5.2 流式分选侧群干细胞 229

6.5.3 流式分选间充质干细胞 231

6.5.4 流式分选肿瘤干细胞 232

参考文献 235

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